Вести

Јавасцрипт је тренутно онемогућен у вашем претраживачу.Неке функције ове веб странице неће радити ако је ЈаваСцрипт онемогућен.
Региструјте се са својим специфичним подацима и одређеним леком који вас интересује, а ми ћемо упарити информације које дате са чланцима у нашој опсежној бази података и одмах ћемо вам послати ПДФ копију.
Динг Јингнуо, Зхао Веифенг, одељење за инфективне болести, прва придружена болница Универзитета Сузхоу, град Суџоу, провинција Ђангсу, 215000 Тел.тумори дигестивног система са 5-годишњим укупним преживљавањем од 14,1%.Многи пацијенти са ХЦЦ се дијагностикују у узнапредовалој фази, тако да је рани скрининг од суштинског значаја за смањење смртности од ХЦЦ.Поред уобичајених индикатора за детекцију као што су алфа-фетопротеин у серуму (АФП), алфа-фетопротеин који реагује на лектин сочива (АФП-Л3) и абнормални протромбин (протеин ИИ изазван недостатком витамина К, ПИВКА-ИИ), технике биопсије течности Показало се да има дијагностичку вредност у откривању ХЦЦ.У поређењу са инвазивним процедурама, биопсија течности може открити циркулишуће малигне метаболите.Технике биопсије течности откривају циркулишуће туморске ћелије, циркулишућу туморску ДНК, циркулишућу РНК и егзозоме и користе се за рани скрининг, дијагнозу и прогностичку процену ХЦЦ.Овај чланак даје преглед молекуларне биологије и примене различитих техника биопсије течности за изоловање обећавајућих биомаркера који могу бити одрживе опције за рану процену ХЦЦ како би се побољшао рани скрининг група са високим ризиком од ХЦЦ.Кључне речи: техника биопсије течности, хепатоцелуларни карцином, група високог ризика.
Хепатоцелуларни карцином (ХЦЦ) је чест малигни тумор дигестивног тракта, који се налази на шестом месту међу новим случајевима малигних тумора и код мушкараца и код жена.1 Широм света, рак јетре је трећи водећи узрок смрти од рака после рака плућа и колоректалног карцинома, чинећи 8,3% смртних случајева повезаних са раком од свих малигних неоплазми.1 Прогноза ХЦЦ је уско повезана са стадијумом дијагнозе.Главни разлози лошег преживљавања код ХЦЦ су интрахепатичне метастазе, тромби тумора порталне вене и удаљене метастазе које онемогућавају ресекцију, а многе од ових карактеристика су већ присутне код пацијената у време постављања дијагнозе.
На основу смерница за дијагностику и лечење, главни фактори ризика за развој ХЦЦ су цироза јетре, инфекција хроничним вирусом хепатитиса Б (ХБВ) или хепатитис Ц вирусом (ХЦВ), алкохолна масна болест јетре и неалкохолна масна болест јетре (НАФЛД). ).2 Поред тога, фактори ризика за ХЦЦ укључују унос хране контаминиран афлатоксином, шистосомијазу, друге узроке цирозе, породичну историју рака јетре, дијабетес, гојазност, пушење и повреде јетре изазване лековима.Ризичне групе од 35 и 45 година треба да имају редовне лекарске прегледе.Рани скрининг је важна стратегија раног лечења за побољшање укупног преживљавања пацијената са ХЦЦ.
Биомаркери као што су АФП, АФП-Л3 и ПИВКА-ИИ се препоручују за рани скрининг ХЦЦ3,4.Технике течне биопсије показале су обећавајуће резултате у раној дијагнози и евалуацији лечења.5,6 Значајан напредак је постигнут у течној биопсији ХЦЦ, која може имати већу осетљивост и специфичност од уобичајених серумских маркера као што је АФП (Табела 1).
АФП је биомаркер који се широко користи у ХЦЦ и тренутно је најдетаљнији биомаркер који се широко користи за рани скрининг, дијагнозу и евалуацију болести.Стално повишен ниво АФП се сматра фактором ризика за прогресију ХЦЦ.7,8 Стопа детекције малог хепатоцелуларног карцинома (сХЦЦ) расте са развојем ултразвука и компјутерске томографије, а показало се да је АФП посебно неосетљив на детекцију хХЦЦ у клиничкој пракси.Према ретроспективној мултицентричној студији9, АФП позитиван је пронађен у 46% (616/1338) случајева ХЦЦ и 23,4% (150/641) случајева сХЦЦ.Поред тога, нивои АФП су повишени код пацијената са хроничним обољењем јетре и цирозом.10 Дакле, АФП има ограничен ефекат скрининга за сХЦЦ.11 Према Смерницама азијско-пацифичке клиничке праксе за хепатоцелуларни карцином, употреба АФП се не препоручује.12 Клинички докази сугеришу да је ПИВКА-ИИ бољи од АФП у лечењу ХЦЦ и да комбинација ПИВКА-ИИ и АФП има већа дијагностичка вредност код ХЦЦ.13 У поређењу са биопсијом ткива, течна биопсија првенствено открива метаболите повезане са тумором у телесним течностима (крв, пљувачка, плеурална течност, цереброспинална течност или урин) и мање је инвазивна за ткива.14 Поред тога, течне биопсије могу одражавати малигне карактеристике које нису присутне у примарном туморском ткиву.15 Течне биопсије се још не тестирају у клиничкој пракси за све врсте тумора, али њихов дијагностички потенцијал код рака привлачи пажњу онколога.16 Флуидна биопсија може открити циркулишуће туморске ћелије (ЦТЦ), циркулишућу туморску ДНК (цДНК), циркулишућу слободну РНК (ецРНА) и егзозоме.У овом чланку ћемо разговарати о карактеристикама, улози и примени различитих техника биопсије течности у раном скринингу група са високим ризиком од ХЦЦ.
Екстрацелуларну ДНК (цфДНК) у узорцима крви здравих особа први су описали 1948. Мандел ет ал.17 цфДНК је фрагмент ДНК без ћелија дужине приближно 160–180 бп, који потиче првенствено из лимфоцита и мијелоидних ћелија.цтДНК је специфични мутантни ДНК фрагмент који туморске ћелије ослобађају у периферну крв, који представља геномску информацију туморских ћелија након одређених патофизиолошких процеса, укључујући некрозу, апоптозу и излучивање.Удео цтДНК у укупној цфДНК увелико варира у зависности од типа тумора, а наводи се да су фрагменти цДНК типично дужи од 167 бп.18 Ундерхиллова студија је показала да су цфДНК фрагменти генерално краћи од нормалне цфДНК.19 У поређењу са здравим особама, укупна дужина цфДНК фрагмената у крви пацијената оболелих од рака је краћа, тако да се цфДНК може користити као индикатор раног скрининга тумора.Обогаћивање одређених подскупова дужина фрагмената цфДНК може побољшати детекцију цДНК повезане са неметастатским чврстим туморима.Студије су показале да се цтДНК налази у преко 75% узнапредовалог рака панкреаса, дебелог црева, бешике, гастроинтестиналног тракта, јетре, јајника, дојке, меланома и рака главе и врата.20,21 Међутим, количина цтДНК у крви зависи од локације тумора.22 У студији коју је спровела Беттегоуд, откривено је да пацијенти са колоректалним карциномом, карциномом дојке, јетре, плућа и простате имају већи ниво цДНК у крви од других карцинома.Насупрот томе, код пацијената са оралним карциномом, раком панкреаса, карциномом желуца и глиомом, концентрација цДНК у крви била је нижа.двадесет један
Пошто цтДНК садржи исте генетске мутације као примарне туморске ћелије, цДНК се може користити за откривање хетерогених тумор-специфичних мутација и епигенетских промена, укључујући метилацију, хидроксиметилацију, варијације појединачних нуклеотида и варијације броја копија.двадесет три
Метилација ДНК је једна од најчешћих епигенетских промена које резултирају репресијом гена.У поређењу са нормалним ћелијама, постоје разлике у укупном нивоу метилације генома туморске ћелије, посебно у метилацији гена супресора тумора, што се може открити у раној фази, што сугерише да промене у метилацији ДНК могу бити показатељ раног откривање туморигенезе.Туморски супресорски гени повезани са ХЦЦ могу бити инактивирани метилацијом промотера, чиме се стимулише туморигенеза.24 ДНК метилација је идеалан маркер за рану дијагнозу тумора због своје специфичности ткива, могућности детекције и независности од старости.Поред тога, метилација ДНК је чешћа у поређењу са соматским мутацијама јер постоји више циљних региона и неколико измењених ЦпГ места у сваком региону циљног генома.25 Поред вишеструких ЦпГ места, велики број независних хиперметилованих локуса у цтДНК је идентификован у ДБКС2, ТХИ1, МТ1М, ИНК4А, ВИМ, ФБЛН1 и РГС10.26 Ксу ет ал.Поређење узорака цфДНК од 1098 пацијената са ХЦЦ и 835 здравих контрола је показало да су гени повезани са ХЦЦ у снажној корелацији са одговарајућим потписима метилације цДНК у плазми.25 На основу лабораторијске анализе развијен је предиктивни модел који садржи 10 маркера метилације са сензитивношћу и специфичношћу од 85,7% и 94,3%, респективно, а ови маркери су у великој корелацији са масом тумора, стадијумом тумора и одговором на лечење.Ови резултати указују на то да употреба маркера метилације цДНК има велико обећање у дијагнози, праћењу и прогнози ХЦЦ.У моделу метилације који се састоји од три аберантно метилована гена (АПЦ, ЦОКС2, РАССФ1А) и једне миРНК (миР203) коју су представили Лу и сарадници27, осетљивост и специфичност модела 27 за дијагностиковање ХБВ-повезаног ХЦЦ-а су биле упоредиве.80%.Поред тога, модел би могао да открије 75% недијагностикованих пацијената са ХЦЦ са нивоом АФП од 20 нг/мЛ.Ген за протеин фамилије 1А домена повезан са Рас (РАССФ1А) је главна репетитивна ДНК секвенца у људском геному.Араујо и др.закључили су да хиперметилација промотора РАССФ1А може бити вредан биомаркер за рани скрининг ХЦЦ и потенцијална молекуларна мета за епигенетску терапију.28 У једној студији, хиперметилација промотора РАССФ1А у серуму пронађена је код 73,3% пацијената са ХЦЦ.29 Дуго интерсперговани нуклеотидни елемент 1 (ЛИНЕ-1) је још један веома активан медијатор ретротранспозиције.Хипометилација ЛИНЕ-1 је пронађена у ДНК 66,7% узорака серума ХЦЦ и била је повезана са раним рецидивом и лошим преживљавањем након радикалне ресекције.29 Хиперметилација је уобичајен генетски процес који игра јединствену улогу у развоју цирозе јетре и ХЦЦ.30 Насупрот томе, хидроксиметилација је процес деметилације који индукује реактивацију и експресију гена, а детекција производа 5-хидроксиметилцитозина (5-хмЦ) у овом процесу може се користити за идентификацију тумора.Метилација и хидроксиметилација цДНК су повезане са туморигенезом и могу допринети раном скринингу ХЦЦ.У студији од 2554 испитаника, 31 геномски 5-хмЦс је пронађен у цфДНК узорцима, а 32 гена су идентификована упоређивањем секвенци 5-хмЦ код пацијената са ХЦЦ и група високог ризика као што су оне са хроничним болестима.Дијагностички модели болести јетре.и цироза.Овај модел је био супериорнији од АФП-а у разликовању ХЦЦ-а од нетуморског ткива.
Мутације у кодирајућим регионима могу довести до транскрипционих абнормалности, што може довести до промена у протеинским секвенцама и на крају до рака.Једнонуклеотидне варијанте су важни геномски маркери за рани скрининг тумора због њихове високе поузданости ткива и високе специфичности тумора и ткива.Бројне студије везане за ХЦЦ које користе секвенцирање следеће генерације (НГС) за секвенцирање егзома и целог генома рака идентификовале су уобичајене мутиране ћелијске гене као што су ТП53 и ЦТННБ1, као и неколико укључујући АРИД1А, МЛЛ, ИРФ2.Нови гени, АТМ, ЦДКН2А, ФГФ19, ПИК3ЦА, РПС6КА3 и ЈАК1 показују умерене стопе мутација. Анализа функције мутантних гена сугерише да промене у ремоделовању хроматина, трансдукцији сигнала Внт/β-катенина и ЈАК/СТАТ, путу П53-ћелијског циклуса, епигенетским модификаторима, путевима оксидативног стреса, путу ПИ3К/АКТ/МТОР и РАС/РАФ/ Пут МАПК киназе игра кључну улогу у онкогенези ХЦЦ.32,33 У студији у којој су откривене мутације повезане са тумором, Хуанг и сарадници су открили да је учесталост мутација повезаних са тумором зависних од цтДНК била 19,5%, а специфичност 90% .34 Поред тога, код пацијената који су доживели васкуларну инвазију је већа вероватноћа да ће имати мутације цтДНК (П=0,041) и краће преживљавање без рецидива (П<0,001). Анализа функције мутантних гена сугерише да промене у ремоделовању хроматина, трансдукцији сигнала Внт/β-катенина и ЈАК/СТАТ, путу П53-ћелијског циклуса, епигенетским модификаторима, путевима оксидативног стреса, путу ПИ3К/АКТ/МТОР и РАС/РАФ/ Пут МАПК киназе игра кључну улогу у онкогенези ХЦЦ.32,33 У студији у којој су откривене мутације повезане са тумором, Хуанг и сарадници су открили да је учесталост мутација повезаних са тумором зависних од цтДНК била 19,5%, а специфичност 90% .34 Поред тога, код пацијената који су доживели васкуларну инвазију је већа вероватноћа да ће имати мутације цтДНК (П=0,041) и краће преживљавање без рецидива (П<0,001).Анализа функције мутантних гена сугерише да промене у ремоделовању хроматина, Внт/β-катенину и ЈАК/СТАТ сигнализацији, путу ћелијског циклуса П53, епигенетским модификаторима, путевима оксидативног стреса, ПИ3К/АКТ/МТОР путу и ​​РАС/РАФ/МАПК киназном путу играју улогу критичну улогу у туморигенези ХЦЦ.32,33 У студији која је открила мутације повезане са тумором, Хуанг ет ал.открили да је учесталост мутација повезаних са тумором зависних од цтДНК 19,5%, а специфичност 90%..34 Осим тога, у пацијенте с сосудистој инвазијом чешће встречались мутации цДНК (П=0,041) и более короткаа безрецидивна виживаемость (П<0,001). .34 Поред тога, пацијенти са васкуларном инвазијом имали су више мутација цДНК (П=0,041) и краће преживљавање без болести (П<0,001).Функционална анализа мутантних гена открила је ремоделирање хроматина, Внт/β-катенин и ЈАК/СТАТ сигнализацију, пут ћелијског циклуса П53, епигенетичке модификаторе, пут оксидативног стреса, пут ПИ3К/АКТ/МТОР и РАС/РАФ/МАПК киназни пут игра кључну улогу у онкогенези ХЦЦ. 32,33 在 项 检测 到 肿瘤 肿瘤 突变 研究 的 研究 中 中 中 发现 发现 发现 发现 发现 肿瘤 肿瘤 肿瘤 肿瘤 肿瘤 肿瘤 相关 突变 的 的 的 的 的 频率 的 频率 频率 频率 19,5%, 特异性 为 90% .34 此外, 经历 血管 侵犯 的 患者 更 更 侵犯 的 患者 此外 更 侵犯 的 患者突变（П=0,041)和更短的无复发生存期 (П<0,001). 32.33 在 项 检测 到 相关 相关 的 研究, Хуанг 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 依赖于 肿瘤 突变 依赖于 依赖于 的 为 为 为 为 为 19,5%, 特异性 特异性 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ЦТДНА 突变 (п = 0.041) 和 和 更短的无复发生存期 (П<0,001).32,33 У студији која је открила мутације повезане са тумором, Хуанг ет ал.открили да су мутације повезане са тумором 19,5% зависне од цДНК са специфичношћу од 90% 34. Поред тога, код пацијената који су били подвргнути васкуларној инвазији је већа вероватноћа да ће развити цДНК.мутациа (П = 0,041) и более короткаа безрецидивна виживаемость (П <0,001). мутација (П=0,041) и краће преживљавање без болести (П<0,001).Још један уобичајени ген покретача ХЦЦ-а је ТП53, који има стопу мутације од преко 30%.Студије су показале да се учесталост мутација ТП53 у цтДНК у крви и урину креће од 5% до 60%.35 Јоханова студија је показала да спектар мутације цтДНК код касног ХЦЦ има сличну стопу мутације као и раног ХЦЦ, укључујући ТЕРТ промотер (51%), ТП53 (32%), ЦТННБ1 (17%), ПТЕН (8%), мутације у АКСИН1 ., АРИД2, КМТ2Д и ТСЦ2 (по 6%).36 Онкоген β-катенина (ЦТННБ1) игра важну улогу у Внт сигналном путу.Коактиватор транскрипције ЦТННБ1 може промовисати експресију гена, што може довести до пролиферације ћелија, инхибиције апоптозе и ангиогенезе.ЦТННБ1 такође може да ступи у интеракцију са ТЕРТ-ом да изазове трансформацију хепатоцита.33 ТЕРТ промотер је често мутиран у неким солидним туморима.Промене у ТЕРТ-у, једној од најранијих генетских промена у малигној трансформацији ХЦЦ, могу довести до реактивације теломеразе у циротским хепатоцитима и могу подстаћи пролиферацију и спречити старење.Пријављено је да се мутације у промотору 33-37 ТЕРТ јављају код 59-90% пацијената са пролиферативним нодулима јетре и раним ХЦЦ и повезане су са преживљавањем.38
Промене броја копија (ЦНА) су важан подтип соматских мутација.Истраживања су показала да је широко распрострањено и фокусно оптерећење ЦНА геномски потпис способан да предвиди туморску имунолошку инфилтрацију и искључење код неких врста рака.39 Активна инфилтрациона сигнализација, висока цитолитичка активност, тешка инфламација и генетски маркери повезани са презентацијом антигена у ХЦЦ.Анализа низа података о полиморфизму појединачних нуклеотида код 477 испитаника показала је ниско оптерећење ЦНС-а.Насупрот томе, хромозомски нестабилни тумори са високим екстензивним оптерећењем ЦНА показали су знаке имунолошког одбацивања и били су повезани са пролиферацијом, поправком ДНК и дисфункцијом ТП53.Ксу ет ал.показала је да је група ХЦЦ имала више ЦНА резултате од групе са хроничним обољењем јетре.40 Користећи секвенцирање целог генома једне ћелије, откривено је да се ЦНА појављују рано у хепатокарциногенези и остају релативно стабилне током прогресије тумора.41 Цхунг ет ал.открили да су нивои цфДНК значајно повишени код пацијената са ХЦЦ и да су ЦНА у цфДНК у целом геному важан независни прогностички маркер код пацијената са ХЦЦ леченим сорафенибом.42 Пацијенти са већим ЦНА оптерећењем су имали већу вероватноћу да ће имати прогресију болести и смрт од оних са мањим ЦНА оптерећењем.Оллерицх ет ал.открили да се индекс нестабилности броја копија (ЦНИ) може користити за процену ЦНА у цфДНК пацијената са раком.Они су приметили да су пацијенти са узнапредовалим раком имали значајно више ЦНИ резултате од контролне групе, која процењује одговор пацијената на системску хемотерапију и имунотерапију.43 Ови резултати сугеришу да ЦНА пронађени у узорцима течне биопсије могу послужити као прогностички индикатори код пацијената са узнапредовалим раком.ХЦЦ на позадини системске терапије.
Тренутно се методе које се користе за откривање цтДНК могу поделити на циљане и нециљане методе.Укратко, циљане методе као што су ланчана реакција дигиталне полимеразе (дПЦР), БЕАМинг дигитални ПЦР, Амплифицатион Рефрацтори Мутатион Систем-ПЦР, Цапп-Сек и Там-Сек су веома осетљиве на унапред дефинисане гене.Методе ван циља, као што су секвенцирање целог генома и НГС, пружају свеобухватан поглед на цео геномски пејзаж.44 У поређењу са циљним панелима, секвенцирање целог генома може да открије не само тачкасте мутације и уметања, већ и преуређење и варијације броја копија.прогноза, а ЦТЦ и цфДНК су добри индикатори који се могу користити за динамичко праћење ХЦЦ.45 Поред тога, цфДНК анализа може бити кориснија у откривању ХЦЦ.Иан ет ал.показало је да је цфДНК у плазми пацијената са ХЦЦ значајно виша него код пацијената са фиброзом јетре и здравих контрола.У поређењу са АФП-ом, очекује се да ће цтДНК бити бољи скрининг маркер за рани ХЦЦ.46 У проспективној студији од 47 течних биопсија које су тестирале цфДНК и протеине у популацији становништва, показало се да су ефикасне у разликовању пацијената са ХЦЦ од пацијената без ХЦЦ.У праћењу 331 ултразвучног нормалног и АФП-негативног пацијента, осетљивост и специфичност цфДНК за дијагнозу ХЦЦ су биле 100% и 94%, респективно, тако да је цДНК могла открити ХЦЦ код асимптоматских ХБсАг серопозитивних особа.У студији Иео48, висока учесталост (92,5%) хиперметилације промотора РАССФ1А пронађена је код пацијената са ХЦЦ.Поред тога, Ксу ет ал.креирао дијагностички модел за предвиђање ХЦЦ користећи панел специфичних маркера метилације са специфичношћу и осетљивошћу од 90,5% и 83,3%, респективно.Панел омогућава да се пацијенти са ХЦЦ разликују од пацијената са другим обољењима јетре, што је боље од АФП-а.Такође су открили да нормалне контроле које су биле позитивне могу имати факторе ризика за ХЦЦ, као што су ХБВ инфекција или историја употребе алкохола.25 Претпостављамо да фактори високог ризика за ХЦЦ могу да промовишу хиперметилацију цфДНК, која затим доприноси прогресији ХЦЦ, и стога цфДНК може играти кључну улогу у скринингу за групе високог ризика.Цаи ет ал.сумирају читав низ цтДНК мутација и нуде робусну стратегију за процену туморског оптерећења код пацијената.49 Ова стратегија може да идентификује туморигенезу просечно 4,6 месеци пре промене слике и показала је супериорне дијагностичке перформансе у поређењу са серумским биомаркерима АФП, АФП-Л3 и ПИВКА-ИИ.Дијагностичка вредност цДНК тестирања је демонстрирана када евалуација слике није доступна, тако да је цДНК тестирање од вредности у дијагнози раног ХЦЦ-а у групама високог ризика.Недавно су научници користили НГС технологију да анализирају индикаторе мултиваријантне генетске варијације (укључујући 5-хидроксиметилцитозин, 5′-мотив, фрагментацију, трагове нуклеозома, ХИФИ) у 3204 клиничка узорка и цфДНК.50 поново валидираних ХИФИ модела са три независна скупа за обуку, тестирање и тестове показало је стабилну и поуздану дискриминацију између ХЦЦ и не-ХЦЦ популације са 95,79% и 95,42% осетљивости у ХЦЦ-специфичним тестним и тест сетовима, респективно.Полова је било 95,00%, односно 97,83%.Дијагностичка вредност ХИФИ методе је већа од АФП у разликовању ХЦЦ од цирозе.Поред тога, цтДНК се такође користи у хируршком лечењу.Атсусхи ет ал.утврдили су преоперативне серумске нивое цтДНК код пацијената са ХЦЦ и открили да су стопа рецидива и стопа екстрахепатичних метастаза у цДНК позитивној групи биле значајно веће него у цДНК негативној групи, а нивои цДНК су у значајној корелацији.са прогресијом тумора.51 Будући да је високо осетљив биомаркер, цтДНК може предвидети способност ХЦЦ-а да нападне крвне судове.Ванг и др.урађено секвенцирање целог генома 46 пацијената са ХЦЦ, а мултиваријантна анализа је показала да је гранична вредност фреквенције алела варијанте цДНК за инвазију у микросудове 0,83%, осетљивост 89,7% и специфичност 80,0%.независни фактор ризика за микроваскуларну инвазију код ресектабилног ХЦЦ-а, што сугерише да цДНК може помоћи у вођењу оптималног лечења.У закључку, цтДНК је у потпуности укључен у појаву и развој ХЦЦ и може се користити за рани скрининг, хируршку процену и праћење болести.
ЦТЦ су малигне ћелије изведене из примарних тумора или метастаза које метастазирају у крвоток.Туморске ћелије луче матрикс металопротеиназе (ММП), које разграђују базалну мембрану, омогућавајући туморским ћелијама да директно уђу у крвне и лимфне судове.Међутим, већина ЦТЦ се брзо елиминише аноикијем, имунолошким нападом или стресом на смицање.53 Епително-мезенхимална транзиција (ЕМТ) омогућава да се ЦТЦ лако изолују из примарног туморског ткива, упадну у капиларе и стекну значајно побољшано преживљавање, метастазе, инвазивност и резистенцију на лекове.Студије су показале да постоји дубока хетерогеност међу различитим туморским ћелијама у примарним метастатским туморима.Дакле, ЦТЦ анализа може довести до свеобухватног разумевања хетерогености туморских ћелија.54
Специфични маркери за ЦТЦ-ове повезане са ХЦЦ укључују глипикан-3 (ГПЦ3), асијалогликопротеински рецептор (АСГПР), молекул адхезије епителних ћелија (ЕпЦАМ) и маркере повезане са матичним ћелијама као што су ЦД44, ЦД90, 55 и међућелијски адхезиони молекул (молекула интерцелуларне адхезије ИЦАМ11).) .56 ГПЦ3 маркер је протеин усидрен на ћелијској мембрани који се клинички користи за патолошку анализу и карактеризацију ХЦЦ.57 Експресија ГПЦ3 је чешћа у ћелијама тумора ХЦЦ са средњом и ниском диференцијацијом и промовише екстрахепатичну миграцију;поред тога, присуство ГПЦ3+ ЦТЦ-а указује на метастатски ХЦЦ.58 АСГПР је трансмембрански протеин експримиран само на површини хепатоцита и високо је експримиран у добро диференцираним ХЦЦ.ЕпЦАМ је један од најчешће коришћених протеина повезаних са мембраном за хватање ЦТЦ.ЕпЦАМ је идентификован као површински маркер ћелија ХЦЦ са карактеристикама матичних ћелија,59 што је у корелацији са различитим клиничкопатолошким карактеристикама ХЦЦ, као што су васкуларна инвазија, процењени нивои АФП-а и узнапредовали стадијум рака јетре у болници у Барселони (БЦЛЦ).Фенотип 60 ЦТЦ ЕМТ је веома метастатски.54 ЕМТ процеси у ЦТЦ промовишу метастазе ХЦЦ.Експресија ЕМТ маркера као што су виментин, твист, Е-бок цинк фингер биндинг (ЗЕБ) 1, ЗЕБ2, пуж, пуж и Е-кадхерин проучавана је код ЦТЦ-ова добијених из јетре код пацијената са ХЦЦ.58 ЦанПатрол™ систем који је развио Цхенг [61] класификовао је ЦТЦ у три фенотипске подгрупе на основу претежно изражених маркера: епителни фенотип (ЕпЦАМ, ЦК8/18/19), мезенхимски фенотип (виментин, умотани) и мешани фенотипови.Код 176 пацијената, укупни ЦТЦ је био бољи од АФП у разликовању ХЦЦ од бенигне болести јетре.Вредности АУЦ за укупни ЦТЦ, АФП и комбиноване укупне ЦТЦ и АФП биле су 0,774 (95% ЦИ, 0,704–0,834), 0,669 (95% ЦИ, 0,587–0,750) и 0,821 (95% ЦИ, 0,856–0,856– ).), редом.ЦТЦ класификација заснована на ЕМТ може предвидети дијагнозу ХЦЦ, рани рецидив, метастазе и краће укупно време.
Тренутно методе за откривање ЦСЦ укључују физичке методе и биолошке методе.Физичке методе, које се често називају обогаћивање на основу биофизичких својстава, углавном зависе од физичких својстава ЦСЦ-а, као што су величина, густина, наелектрисање, покретљивост и деформабилност.У зависности од физичких својстава, постоје различите методе као што су системи засновани на филтрацији, диелектрофореза, итд. Ово последње, такође познато као обогаћивање засновано на имуноафинитету, углавном се заснива на везивању антиген-антитело пошто метода користи антитела против тумор-специфичних биомаркера као што су ЕпЦАМ, АСГПР, рецептор хуманог епидермалног фактора раста 2 (ХЕР2), антиген специфичан за простату (ПСА), хумани панцитокератин (П-ЦК) и карбамоил фосфат синтаза 1 (ЦПС1).62 Други тип, који се зове метода без обогаћивања, користи проточну цитометрију да би разликовао ЦТЦ од леукоцита на основу већег односа и величине нуклеарног према цитоплазматском.Тренутно, једини тест за детекцију ЦТЦ-а који је одобрила ФДА је Целл-Сеарцх™ систем, који користи ЕпЦАМ површински маркер ћелије. Међутим, комбинована детекција ЦТЦ заснована на маркерима може повећати стопу позитивности.54 Мешавина антитела против АСГПР и ЦПС1 постигла је стопу детекције ЦТЦ од 91% код пацијената са ХЦЦ.63 Зханг и сарадници су користили ЦТЦ-чип са антителима против АСГПР, П -ЦК и ЦПС1, и диференцира пацијенте са ХЦЦ од оних са бенигним обољењем јетре или не-ХЦЦ карциномом у стопи од 100%.64 Вангова студија је открила ЕпЦАМ+ ЦТЦс код 60% од 42 пацијента са ХЦЦ и открила значајне корелације између оба позитивности. стопу и број ЦТЦ са ТНМ стадијумом.65 Гуо и сарадници су открили да је ПЦР резултат добијен из ЦТЦ повишен код 125/171 (73%) пацијената чији је ниво АФП био <20 нг/мЛ са осетљивошћу од 72,5% и специфичност од 95,0%, у поређењу са 57,0% и 90,0% за АФП при граничној вредности од 20 нг/мЛ.66 Комбинација АФП и ЦТЦ може побољшати детекцију ХЦЦ.45 Верује се да ЦТЦ имају предност у односу на АФП у раном скринингу група. са високим ризиком за ХЦЦ. Међутим, комбинована детекција ЦТЦ заснована на маркерима може повећати стопу позитивности.54 Мешавина антитела против АСГПР и ЦПС1 постигла је стопу детекције ЦТЦ од 91% код пацијената са ХЦЦ.63 Зханг и сарадници су користили ЦТЦ-чип са антителима против АСГПР, П -ЦК и ЦПС1, и диференцира пацијенте са ХЦЦ од оних са бенигним обољењем јетре или не-ХЦЦ карциномом у стопи од 100%.64 Вангова студија је открила ЕпЦАМ+ ЦТЦс код 60% од 42 пацијента са ХЦЦ и открила значајне корелације између оба позитивности. стопу и број ЦТЦ са ТНМ стадијумом.65 Гуо и сарадници су открили да је ПЦР резултат добијен из ЦТЦ повишен код 125/171 (73%) пацијената чији је ниво АФП био <20 нг/мЛ са осетљивошћу од 72,5% и специфичност од 95,0%, у поређењу са 57,0% и 90,0% за АФП при граничној вредности од 20 нг/мЛ.66 Комбинација АФП и ЦТЦ може побољшати детекцију ХЦЦ.45 Верује се да ЦТЦ имају предност у односу на АФП у раном скринингу група. са високим ризиком за ХЦЦ.Међутим, комбинована детекција ЦТЦ заснована на маркерима може повећати проценат позитивних резултата.54 Мешавина анти-АСГПР и ЦПС1 антитела је постигла стопу детекције ЦТЦ од 91% код пацијената са ХЦЦ.63 Зханг ет ал.користио ЦТЦ-чип са антителима против АСГПР, П-ЦК и ЦПС1, а такође је разликовао пацијенте са ХЦЦ од оних са бенигним обољењем јетре или не-ХЦЦ у стопи од 100%.частота и број ЦОК са стадијем ТНМ.65 Гуо и соавтори су открили, что показатель ПЦР, получен из ЦОК, био је повишен у 125/171 (73%) пацијената, у которих уровень АФП је био <20 нг/мл с чувственостьу 72,5% и специфичност 95,0% по сравњењу с 57,0% и 90,0% за АФП при пороговом уровну 20 нг/мл.66 Комбинација АФП и ЦОК може улучшит открити ГЦК.45 Считаетса, что ЦОК имају преимућства пред АФП при раннем скринингу групп. учесталост и број ЦТЦ са ТНМ стадијумом.65 Гуо и сарадници су открили да је ПЦР изведен из ЦТЦ био повишен код 125/171 (73%) пацијената који су имали нивое АФП <20 нг/мЛ са осетљивошћу од 72,5% и специфичношћу 95,0% у поређењу са 57,0% и 90,0% за АФП на граничном нивоу од 20 нг/мЛ.66 Комбинација АФП и ЦТЦ може побољшати откривање ХЦЦ.45 Сматра се да ЦТЦ имају предност у односу на АФП у раном скринингу групе.са високим ризиком од ХЦЦ.Међутим, комбинована детекција ЦТЦ-а заснована на маркерима може повећати проценат позитивних резултата.54 Мешавина анти-АСГПР и ЦПС1 антитела је постигла стопу детекције ЦТЦ од 91% код пацијената са ХЦЦ.63 Зханг ет ал.користили су ЦТЦ чипове са антителима против АСГПР, П-ЦК и ЦПС1 и издвојили пацијенте са ХЦЦ од бенигне болести јетре и не-ХЦЦ са 100%.64 Вангова студија је идентификовала 60% ЕпЦАМ+ ЦТЦ код 42 пацијента са ХЦЦ и открила значајну корелацију између инциденције и броја ЦТЦ у ТНМ фази. 65 ГУО 等 人 发现, 在 АФП 水平 <20 нг / мл 的 125/171 (73%) 名 患者 中, ЦТЦ 衍生 的 ПЦР је и 72,5%, 特异性 为 95,0%, 而 АФП 在 截止值为20 нг/мЛ 时的特异性为57,0% 和90,0%. 65 гуо 等 发现 在 在 在 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 水平 н н н н н н н н н 125/171 (73%) 名 患者 ,, цтц 衍生 пцр 评分, 敏感性 为 为 72,5%, 为 95,0%, АФП 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 为 截止 截止 为 为 20нг / мЛ 时 的 特异性 为 57,0% 和 90,0%.65 Гуо ет ал.открили, что у 125/171 (73%) пацијената са уровном АФП <20 нг/мл показатељи ПЦР, добијени помоћу ЦОК, били су повишени с чувственошћу 72,5% и специфичношћу 95,0%, у то време као АФП на уровне отсечки Специфичност составлала 20 нг/мл. открили да су код 125/171 (73%) пацијената са нивоима АФП <20 нг/мЛ, вредности ПЦР добијене из ЦТЦ биле повишене са осетљивошћу од 72,5% и специфичношћу од 95,0%, док је АФП био на граничној специфичности био 20 нг/мЛ.мл је 57,0% и 90,0%.66 Комбинација ОРП и ЦТЦ побољшава детекцију ХЦЦ.Сматра се да су 45 ЦТЦ супериорни у односу на АФП у раном скринингу високоризичних популација ХЦЦ.Стога, за ЦТЦ-позитивне и високоризичне ХЦЦ групе, ЦТЦ тестирање треба рутински комбиновати са ултразвуком и детекцијом АФП.Међутим, ЦТЦ се сматрају важним предикторима туморских метастаза и рецидива, а детекција ЦТЦ се не препоручује независно као дијагностички алат.62 Стога, ЦТЦ може послужити као бољи предиктивни биомаркер од других тренутно коришћених маркера. Зхоу и сарадници су открили да пацијенти са повећаним бројем ЕпЦАМ+ ЦТЦ и регулаторних Т ћелија показују већи ризик од развоја рецидива ХЦЦ, него они са малим бројем ЦТЦ, са односом рецидива од 66,7% наспрам 10,3% (П < 0,001).67 Сличну студију су известили Зхонг и сарадници.68 Поред тога, Ки је открио да је 101 од 112 пацијената (90,81%) са ХЦЦ, укључујући и оне са раном стадијумом болести, били позитивни на ЦТЦ и да су врло мали чворови ХЦЦ откривени након 3 до 5 месеци праћења. Зхоу и сарадници су открили да пацијенти са повећаним бројем ЕпЦАМ+ ЦТЦ и регулаторним Т ћелијама показују већи ризик од развоја рецидива ХЦЦ од оних са малим бројем ЦТЦ, са односом рецидива од 66,7% наспрам 10,3% (П < 0,001).67 А Сличну студију су известили Зхонг и сарадници.68 Поред тога, Ки је открио да је 101 од 112 пацијената (90,81%) са ХЦЦ, укључујући и оне са раном стадијумом болести, били позитивни на ЦТЦ и да су веома мали чворови ХЦЦ откривени након 3 до 5 месеци праћења. Чжоу и др.открили, что у пацијената с повишеним бројем ЦОК ЕпЦАМ+ и регулационим Т-клетоком ризикује развој рецидива ГЦК, што је више него код пацијената са низким бројем ЦОК, са коефицијентом преиедова 66,7% против 10,3% (П <0,001)67. Зхоу и сарадници су открили да пацијенти са повишеним ЕпЦАМ+ ЦТЦ-има и регулаторним Т ћелијама имају већи ризик од рецидива ХЦЦ-а од оних са ниским ЦТЦ-ом, са стопом рецидива од 66,7% наспрам 10,3% (П<0,001)67.Сличну студију су спровели Зхонг ет ал.68. Поред тога, Ки је открио да је 101 од 112 пацијената (90,81%) са ХЦЦ, укључујући и оне са раном болешћу, имао ЦТЦ, и да су врло мали ХЦЦ чворови откривени након 3 до 5 месеци праћења. Зхоу 等 发现, 与 ЦТЦ 数量 较 较 少 较 较 较 少 少 较 少 少 少 少 较 少, ЕПЦАМ + ЦТЦ 和 调节性 Т 细胞 数量 升高 的 患者 ХЦЦ 复发 的 风险 风险 更, 复发率 分别 为 66,7% 和 10,3% (п <0,001). Зхоу 等 发现 与 与 цтц 数量 少 少 的 数量 少 少 的 数量 少 少 的 的 数量, епцам + цтц 和 т 细胞 数量 的 患者 хцц 复发 复发 更, 复发率 分别 风险 更, 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10,3% ( п <0,001) .. . . . . . . . . . . . Чжоу и др.открили, что пацијенти с повишеним бројем ЦОК ЕпЦАМ+ и регулационим Т-клетоком имају већи ризик од појаве ГЦК у поређењу са пацијентима са мањим бројем ЦОК, са частотом понављања 66,7% и 10,3% према томе (П <0,001). Зхоу ет ал.открили су да пацијенти са повишеним ЕпЦАМ+ ЦТЦ и регулаторним Т ћелијама имају већи ризик од рецидива ХЦЦ у поређењу са пацијентима са мање ЦТЦ, са стопама рецидива од 66,7% и 10,3%, респективно (П < 0,001).Сличну студију су известили Зхонг ет ал.68 Поред тога, Ки је открио да је 101 од 112 пацијената са ХЦЦ (90,81%), укључујући пацијенте са раном болешћу, имало позитивне резултате ЦТЦ и открило врло мале чворове ХЦЦ након 3 посете.Посматрање до 5 месеци.Такође су пронашли ЦТЦ код 12 пацијената са хроничном ХБВ инфекцијом и пронашли мале туморе ХЦЦ у року од 5 месеци код 2 ЦТЦ-позитивна пацијента.69 Дакле, ЦТЦ се могу користити за предвиђање ХЦЦ, 70 али се могу рутински користити као предиктивни биомаркери.
Као и цфДНК, цфРНА се ослобађа у крвоток кроз различите системе.Ови молекули у периферној крви представљају канцерогено ткиво порекла.У поређењу са маркерима откривеним неинвазивним методама, цфРНК су више динамички регулисане, специфичне за ткиво и у изобиљу у ванћелијском окружењу.Значај и дијагностичка вредност 71 миРНК (миРНК) у ХЦЦ је пријављена у многим студијама.миРНА су ендогене некодирајуће РНК (нцРНА) које регулишу различите молекуларне биолошке активности инхибирањем транслације циљних РНК за гласнике (мРНК).миРНА се налазе у апоптотичким телима инкапсулираним у егзозоме, али се такође могу стабилно везати за серумске протеине и липиде у периферној крви и могу се користити за процену ХЦЦ.микроРНА су укључене у регенерацију јетре, метаболизам липида, апоптозу, упалу и развој ХЦЦ.72 Онкогене миРНА као што су миР-21, миР-155 и миР-221 су добро познате у ХЦЦ.Конкретно, миР-21 игра кључну улогу у синтези колагена у екстрацелуларном матриксу и фибрози и промовише хепатокарциногенезу активирањем хематопоетских матичних ћелија.72,73 МиРНА супресора тумора у ХЦЦ укључују миРНА-122, миРНА-29, породицу Лет-7 и породицу миРНА-15.Породица Лет-7 састоји се од многих миРНА супресора тумора које циљају на породицу РАС.Породица миР-15 укључује миР-15а, миР-15б, миР-16, миР-195 и миР-497, који имају комплементарне секвенце за одређене мРНК.Поред тога, дуге некодирајуће РНК (лнцРНА) и кружне РНК (цирРНА) су такође важне за рани скрининг ХЦЦ.лнцРНА представљају најширу класу нцРНА, укључујући нцРНА сличне мРНК, и укључене су у патогенезу многих људских болести.ЛнцРНА играју регулаторну улогу у микроокружењу јетре и хроничној болести јетре.74 ЦирцРНА су такође класа нцРНА са вишеструким функцијама у регулацији експресије гена.Недавно су цирцРНА сматране дијагностичким алатима за ХЦЦ.
Циркулишућа слободна РНК има изузетну стабилност, укључујући отпорност на температуру, пХ и РНКазу, што чини изолацију фнРНК из периферне крви мање заморном употребом стандардних метода пречишћавања РНК.Најчешће коришћене методе укључују НГС, микрониз и РТ-кПЦР.НГС омогућава мерење микроРНК у целом геному.Међутим, овај метод је скуп и анализа није стандардизована.Насупрот томе, РТ-кПЦР је јефтин, брзо појачава нуклеинске киселине и нуди многе предности као што су већа осетљивост, већа прецизност, шири динамички опсег и захтева мање узорака.Микронизови су још један метод који се користи за детекцију миРНА заснован на осетљивој и специфичној хибридизацији циљних миРНК са комплементарним ДНК сондама, 75 али анализа података микромрежа одузима много времена.
Извештава се да су циркулишући миР-122 и Лет-7 потенцијално корисни у дијагностици раног стадијума ХЦЦ у групама високог ризика, маркера код пацијената са премалигним чворовима повезаним са ХБВ и ХЦЦ у раном стадијуму.76 Цаи ет ал.открили да су чланови породице Лет-7 (миР-92, миР-122, миР-125б, миР-143, миР-192, миР-16, миР-126 и миР-199а/б) изложени ризику од хроничне ХЦЦ код пацијената са хепатитисом.Породица Лет-7 може послужити као ефикасан сурогат биомаркер за предвиђање развоја ХЦЦ у групама високог ризика повезаних са хроничним хепатитисом Ц. 77 миР-122 има високу дијагностичку тачност у откривању раног ХЦЦ код пацијената са цирозом јетре.78 Серум који циркулише МиР-107 је такође процењен у раним фазама ХЦЦ, 79 и показао је добар потенцијал у популацијама високог ризика.Зхоу ет ал су известили да панел миРНА (миР-122, миР-192, миР-21, миР-223, миР-26а, миР-27а и миР-801) може разликовати ХЦЦ од хроничног хепатитиса Б (ЦХБ) и цирозе сензитивност је била 79,1% и 75%, а специфичност 76,4% и 91,1%, респективно.80 У ХБВ повезаним ХЦЦ, открили смо да су нивои миР150 значајно смањени у поређењу са онима код хроничних ХБВ пацијената без ХЦЦ (осетљивост 79,1%, специфичност 76,5%).-224 је било повишено код ХЦЦ у поређењу са здравим контролама, а анализе подгрупа су показале више нивое код пацијената са ХЦЦ повезаним са ХБВ.пацијенти са цирозом повезане са хепатитисом Б и ХЦЦ су идентификовали сиРНА класификатор који садржи седам различито експримираних сиРНА које могу открити ХЦЦ у различитим контролама;Опсег АУЦ на раном скринингу је бољи од АФП добровољаца.Открили су да четири миРНА (миР-1972, миР-193а-5п, миР-214-3п и миР-365а-3п) могу разликовати пацијенте са ХЦЦ од пацијената без ХЦЦ.Пет миРНА са прекомерном експресијом (миР-122-5п, миР-125б-5п, миР-885-5п, миР-100-5п и миР-148а-3п) се сматрају потенцијалним ХБВ инфекцијама код ХЦЦ, цирозе и ЦХБ биомаркера, посебно миР-34а-5п може бити биомаркери за цирозу јетре,85 и могу бити потенцијални биомаркери за рани скрининг ХЦЦ у високоризичним популацијама.Највише проучавана лнцРНА у ХЦЦ је високо активирана код рака јетре (ХУЛЦ).Друге студије су показале да се ХУЛЦ који циркулише код пацијената са ХЦЦ може користити као дијагностички маркер јер је ова лнцРНА високо регулисана код пацијената са ХЦЦ у поређењу са здравим особама.71,86 Међу осталим лнРНА, ЛИНЦ00152 се сматра најбољом дијагностичком лнцРНА због своје високе АУЦ, осетљивости и специфичности.86 У једној студији, експресија ЛИНЦ00152 у периферној крви постепено се повећавала од нормалних здравих контрола до пацијената са ЦХБ и цирозом, и на крају је била највећа код ХЦЦ.Студије експресије цирцСМАРЦА5 у плазми пацијената са ХЦЦ су показале прогресивно смањење експресије ХЦЦ у распону од хепатитиса до цирозе и преканцерозних лезија.87 Анализа РОЦ кривих потврдила је потенцијал ових цирцРНА у разликовању пацијената са хепатитисом или цирозом јетре од оних са ХЦЦ, посебно оних са нивоима АФП испод 200 нг/мЛ.Поред тога, Зху је анализирао 13.617 цикличних РНК у узорцима плазме пацијената са ХБВ-ом повезаним са ХЦЦ и потврдио да је 6 цикличних РНК различито изражено код ХЦЦ и цирозе повезане са ХБВ, што сугерише да цРНА могу бити корисне.маркери за рани скрининг високоризичних група као што су они повезани са обољењем јетре, пацијенти са склерозом.88
Егзозоми су мембранске везикуле пречника 40–160 нм;више интрацелуларних везикула се спајају са ћелијском мембраном и ослобађају се у екстрацелуларни матрикс.Они садрже многе активне компоненте, укључујући липиде, протеине, РНК и ДНК, и играју кључну улогу у комуникацији између ћелија, како ХЦЦ тако и не-ХЦЦ ћелија.89,90 Егзозоми регулишу напредовање ХЦЦ активирањем хепатоцитних фибробласта и звездастих ћелија, имуних ћелија, нормалних хепатоцита и ХЦЦ ћелија.91 У микроокружењу тумора, туморске ћелије производе велики број егзозома који се преносе из ћелија рака у незреле ћелије, које су заузврат укључене у онкогенезу, деградацију и ћелијску сигнализацију.92 Истраживања су показала да егзосоми могу да пренесу онкогене у нормалне ћелије током патолошких процеса, што може бити један од механизама туморске инвазије и метастаза.93 Улога егзозома у прогресији рака може бити динамична и специфична за тип рака, 89 Егзозоми могу бити интернализовани од стране суседних или удаљених ћелија да регулишу више циљних гена у ћелијама примаоцима који могу бити укључени у међућелијску комуникацију јона и интеракције ћелијског микроокружења, они могу посредују у ћелијској сигнализацији и метаболизму.94 Карактеристике и динамичке промене карго молекула егзосома директно одражавају карактеристике и динамичке промене родитељских туморских ћелија,95 што је и основа за употребу егзосома у дијагнози и прогнози карцинома, као и за предвиђање индивидуалног одговора на терапију против рака. ..96
Традиционалне лабораторијске методе за изоловање и анализу егзозома су сложене, вишестепене и дуготрајне, укључујући ултрацентрифугирање, филтрацију, хроматографију искључења величине, имуноафинитетно пречишћавање, Вестерн блоттинг, ензимски имуносорбентни тест (ЕЛИСА), ПЦР и анализу протока.минијатуризовани системи и платформе лаб-он-а-цхип које користе микро/нанотехнологију се широко развијају за брзу, погодну ин ситу изолацију егзозома.Анализа праћења наночестица (НТА) је широко коришћена метода за карактеризацију величине и концентрације егзозома, укључујући методе као што су магнетне наночестице и полихидроксиалканоати.Микрофлуидне и електрохемијске методе такође могу брзо да открију егзозоме са високим приносима.
Егзозомални протеини су важни маркери за дијагнозу ХЦЦ.У Арбелаиз студији, ниво 98 РасГАП СХ3 везујућег протеина (Г3БП) и полимерног имуноглобулинског рецептора (ПИГР) био је значајно повишен у егзозомима добијеним од ХЦЦ, а претпостављена комбинована ефикасност два протеина била је супериорнија од оне АФП.Преоптерећење гвожђем је важан фактор који доприноси развоју ХЦЦ.Тсенг је известио да хепцидин може играти кључну улогу у отпорности на ХЦЦ.99 Егзозоми добијени из серума пацијената са ХЦЦ имали су значајно већи број копија варијанти мРНК хепцидина од њихових здравих колега, што сугерише да хепцидин може бити нови дијагностички биомаркер за ХЦЦ.Протеин 14-3-3ζ у егзозомима које производи 100 ХЦЦ може смањити активацију, пролиферацију и диференцијацију Т ћелија и може индуковати трансформацију Т ћелија у регулаторне Т ћелије, што доводи до исцрпљивања Т ћелија.101 Ово је подржано од стране неколико студија које истражују избегавање тумора од имунолошког надзора, 102 што може допринети туморигенези ХЦЦ.
Поред присуства ецРНА у плазми или серуму, егзозоми обогаћени РНК могу се користити за неинвазивно стадијум у реалном времену у раном скринингу тумора и за одређивање еволуције тумора и одговора на терапију.Ниво егзосомалне миРНА-21 у крвном серуму у ХЦЦ групи био је 2,21 пута већи него у ЦХБ групи, а у ХЦЦ групи био је 5,57 пута већи него у здравој популацији.У Ванг студији, егзозоми су значајно повећали ХЦЦ у поређењу са пацијентима са цирозом са АУЦ вредностима од 0,83 (95% ЦИ 0,74–0,93) и 0,94 (95% ЦИ 0,88–1,00).104 Добијени подаци су разјаснили учешће специфичних егзосомалних карго молекула у регулацији онкогенезе и прогресије ХЦЦ.105 Серумска експресија миР-221, миР-103, миР-181ц, миР-181а, миР-93 и миР-26а је конзистентна.и метастазе, а нивои миР21 су били много виши код пацијената са ХЦЦ него код здравих контрола, као и код пацијената са ЦХБ.102 ЛнцРНА је имала потенцијалну дијагностичку вредност код ХЦЦ.Студије су показале да егзозоми изведени из серума пацијената са ХЦЦ имају значајно више нивое ЛИНЦ00161, ЛИНЦ000635 и лнцРНА активиране трансформацијом фактора раста-β него код пацијената без ХЦЦ, а ове лнцРНА су снажно повезане са ТНМ стадијумом и запремином тумора.110 Цониглиаро ет ал.Утврђено је да ЦД90+ егзозоми експримирају високе нивое лнцРНАХ19, што значајно повећава ослобађање васкуларног ендотелног фактора раста (ВЕГФ) и производњу ВЕГФ-Р1 рецептора, чиме се стимулише ангиогенеза.93 ЦирцРНА су још један тип егзозомалних нцРНК – изражене на нижим, али стабилним нивоима међу врстама, цирцРНА такође показују специфичност за тип ћелије, тип ткива, развојну фазу и регулаторну активност.111 цирцРНА су дијагностички биомаркери за рани и минимално инвазивни рак.112 Недавна клиничка испитивања су показала да специфичност појединачних миРНА у предвиђању ХЦЦ није идеална.Стога, комплексна детекција коришћењем вишеструких тестова (нпр. миР-122 и миР-48а у комбинацији са АФП) може побољшати идентификацију раног ХЦЦ-а и диференцијацију ХЦЦ-а од цирозе.100
Пацијенти са ЦХБ и цирозом јетре су најчешћа група високог ризика за развој ХЦЦ.За групе са високим ризиком, када се постигне одржив виролошки одговор, треба развити економичну стратегију надзора засновану на ризику од ХЦЦ, а рани скрининг је кључ за побољшање дијагнозе и лечења ХЦЦ са високим односом исплативости2 ..Методе раног скрининга за рак имају многа ограничења: ефикасне методе раног скрининга нису развијене за већину типова рака, а придржавање је обично ниско.У поређењу са традиционалним методама раног скрининга, технологија течне биопсије има очигледне предности: једноставност узорковања, панрац детекцију, добру репродуктивност узорка и ефикасан одговор на хетерогеност тумора.С обзиром на исплативост метода повезаних са течном биопсијом, њихова употреба у скринингу ХЦЦ није рутински тестирана.Упркос напретку у прецизној детекцији на молекуларном нивоу, биопсија течности је скупа за откривање ХЦЦ код циљних пацијената, ограничавајући њену широку употребу у поређењу са специфичним процедурама снимања као што су ултразвук и магнетна резонанца.113,114 Међутим, претходна студија је показала да је течна биопсија показала значајну корист у погледу година живота прилагођених квалитету (КАЛИ).115 Такође су приказане предности течне биопсије код раног карцинома желуца и назофаринкса.116,117 Тренутни став је да течна биопсија може допунити серумске биомаркере и радиолошки скрининг у откривању и дијагностици тумора.117 118
Према тренутној литератури, технологија биопсије течности је показала значајно већу осетљивост и специфичност у раном скринингу група високог ризика за рак јетре.Без обзира на врсту биопсије течности, она може разликовати ХЦЦ од особа са високим ризиком без ХЦЦ, што указује на важност раног скрининга јер су разлике између високоризичних и здравих особа евидентне.цтДНК има кратак полуживот и може се користити за откривање ХЦЦ-а, тако да све промене у цДНК добијеној из тумора могу пружити конкретне доказе о прогресији тумора у реалном времену, посебно за мале туморе.Висок ниво цтДНК указује на развој и ширење рака и рани је показатељ прогресије и рецидива.Поред тога, на основу резултата цтДНК, пацијенти могу добити индивидуализован третман и праћење.119 Специфична места метилације могу бити бољи маркер од АФП-а за рану идентификацију ХЦЦ и циротичних нодула.У ресектабилним случајевима ХЦЦ, високи нивои цДНК су индикативни за микроваскуларну инвазију и постоперативни рецидив и метастазе.Промене у броју копија повезане су са преживљавањем пацијената са ХЦЦ.Може се претпоставити да цДНК евалуација може бити укључена у целокупни третман ХЦЦ, а цДНК може послужити као ефикасан индикатор терапијске модулације.Маркери засновани на специфичним генетским мутацијама у цтДНК су усвојени у клиничким смерницама за предвиђање ефикасности и праћење резистенције на лекове.цтДНК тестирање може бити најкориснији алат за течну биопсију за рани скрининг.ЦТЦ такође играју кључну улогу у раном скринингу високоризичних група ХЦЦ.Различити маркери ЦТЦ повезаних са ХЦЦ су од посебног значаја у настанку, развоју и рецидиву ХЦЦ.Као мембрански везикули, егзосоми су укључени у међућелијску комуникацију, посебно у ХЦЦ ћелијама.Циркулишуће микроРНА су стабилне у крви и стога могу бити корисније за рани скрининг ХЦЦ.Постепено су откривени егзосомални протеини и егзозоми богати РНК, а њихова предиктивна ефикасност за ХЦЦ је потврђена.Занимљиво је да различите етиологије ХЦЦ могу такође бити повезане са различитим мутацијама, тако да можемо одабрати различите биомаркере за рани скрининг на основу различитих етиологија ХЦЦ.120
Међутим, тренутне технике биопсије течности су упитне у смислу стабилности и не могу независно да изврше рани скрининг или праћење ХЦЦ, али и даље могу да допуне индивидуални скрининг и дијагнозу.121 Као облик течне биопсије, детекција и снимање цтДНК, ЦТЦ, цфРНА и АФП-а или ПИВКА-ИИ повезаних са егзозомима имају обећавајућу примену у раној дијагнози и прогнози ХЦЦ.Међутим, тачан механизам ослобађања цтДНК у крв остаје да се разјасни.Откривање основних биолошких својстава цтДНК може олакшати њену употребу као маркера.Мала количина цтДНК у циркулацији и строги захтеви за руковање узорцима представљају изазове за клиничку примену детекције цДНК у ХЦЦ.Поред тога, генетске мутације немају специфичне карактеристике које омогућавају тачну идентификацију канцерогена.Пошто су вишеструке генетске и соматске варијанте такође присутне у нормалним ткивима, генетске мутације идентификоване течном биопсијом могу бити од ограничене употребе у раном скринингу за ХЦЦ.122 Ограничења добро дефинисаних корисних генских циљева и биомаркера који помажу у разликовању цДНК од нетуморске ДНК су најважнија питања у употреби цДНК.недостатак корисности осетљивих и специфичних маркера за детекцију ЦТЦ.Пронађене су само одрживе ћелије са метастатским потенцијалом, а оптимална комбинација маркера обогаћених ЦСЦ није била јасна.Изолација ЦТЦ-а за културу и евалуација њихових мутационих профила такође је изазован задатак.Због проблема са идентификацијом, изолацијом и пречишћавањем егзозома, специфичан молекуларни механизам је још увек нејасан, а претходне студије о механизму егзозома и ХЦЦ нису биле детаљније, и начин на који се миРНА, лнцРНА и протеини сортирају у егзозоме. , и није јасно да ли је унос егзосома процес специфичног типа.Употреба егзосома за дијагнозу и лечење ХЦЦ је још увек у претклиничкој фази.Недостатак стандардизације процедура течне биопсије, као што су тип епрувета које се користе за прикупљање крви, запремина крви, складиштење и откривање узорака, изолација и обогаћивање, може онемогућити њихову употребу у рутинској клиничкој пракси због разлика у пракси у медицинским центрима.Остаје да се истражи ефикасност течне биопсије у раном скринингу, дијагнози, процени ефикасности и предвиђању ХЦЦ, посебно за групе високог ризика.Технологија течне биопсије има велики потенцијал и очекује се да ће се у блиској будућности широко користити у клиничкој пракси рака јетре.
1. Сунг Х., Фурлеи Ј., Сиегел РЛ ет ал.Глобална статистика рака 2020: ГЛОБОЦАН процењује учесталост и смртност од 36 врста рака у 185 земаља.ЦА Цанцер Ј Цлин.2021;71(3):209-249.дои: 10.3322/цаац.21660
2. Седиште Националне здравствене комисије.Критеријуми за дијагнозу и лечење примарног карцинома јетре (издање 2022) [Ј].Јоурнал оф Цлиницал Ливер Дисеасес, 2022, 38(2): 288-303.дои: 10.3969/ј.иссн.1001-5256.2022.02.009
3. Зхоу Ј, Сун Х, Ванг З, ет ал.Смернице за дијагнозу и лечење хепатоцелуларног карцинома (издање 2019).Рак јетре.2020;9(6):682-720.дои: 10.1159/000509424
4. Кокудо Н, Такемура Н, Хасегава К, ет ал.Смернице за клиничку праксу за хепатоцелуларни карцином: Јапанско друштво за болести јетре, 2017 (ЈСХ-ХЦЦ 4. смернице), ажурирање 2019.Резервоар за болести јетре.2019;49(10):1109–1113.дои:10.1111/хепр.13411
5. Баррера-Салдана ХА, Фернандез-Гарза ЛЕ, Баррера-Баррера СА Течна биопсија у хроничној болести јетре.Анн Хепато.2021;20:100197.дои:10.1016/ј.аохеп.2020.03.008
6. Таи ТКИу., Тан П.Кх.Течна биопсија рака дојке: фокусирани преглед.Арцх Патхол Лаб Мед.2021;145(6):678–686.дои: 10.5858/арпа.2019-0559-РА
7. Канвал Ф., Сингал АГ Надзор за хепатоцелуларни карцином: тренутне најбоље праксе и будући правци.Гастроентерологија.2019;157(1):54-64.дои:10.1053/ј.гастро.2019.02.049
8. Европско истраживачко удружење Л, Европска организација Р, Ц Тхерапеутицс.Клиничке смернице ЕАСЛ-ЕОРТЦ: лечење хепатоцелуларног карцинома.Ј Хепарин.2012;56(4):908–943.дои:10.1016/ј.јхеп.2011.12.001
9. Зханг Г., Ха СА, Ким ХК ет ал.Комбинована анализа АФП и ХЦЦР-1 као корисних серолошких маркера у малом хепатоцелуларном карциному: проспективна кохортна студија.Дис Марк.2012;32(4):265–271.дои: 10.3233/ДМА-2011-0878
10. Цхен С, Цхен Х, Гао С, ет ал.Диференцијална експресија микроРНА-125б у плазми код болести јетре повезаних са вирусом хепатитиса Б и дијагностички потенцијал хепатоцелуларног карцинома изазваног вирусом хепатитиса Б.Резервоар болести јетре.2017;47(4):312-320.дои:10.1111/хепр.12739
11. Халле ПР, Фостер Ф., Кудо М. ет ал.Биологија и значај алфа-фетопротеина у хепатоцелуларном карциному.Ливер инт.2019;39(12):2214–2229.дои: 10.1111/лив.14223
12. Омата М, Цхенг АЛ, Кокудо Н, ет ал.Клиничке смернице за лечење хепатоцелуларног карцинома у азијско-пацифичком региону: ажурирање за 2017.Међународна организација за болести јетре.2017;11(4):317–370.дои: 10.1007/с12072-017-9799-9
13. Ксу Феи, Зханг Ли, Хе Веи ет ал.Дијагностичка вредност серума ПИВКА-ИИ самог или у комбинацији са АФП код кинеских пацијената са хепатоцелуларним карциномом.Дис Марк.2021;2021:8868370.дои: 10.1155/2021/8868370
14. Дурин Л., Прарадинес А., Бассет С. ет ал.Биопсија хуморалне течности не-малих ћелија рака плућа без плазме: ближе тумору!ћелија.2020;9(11).дои: 10.3390/целлс9112486
15. Мадер С, Пантел К. Течна биопсија: тренутно стање и будући изгледи.Треатмент Онцол Рес.2017;40(7-8):404-408.дои: 10.1159/000478018
16. Палмиротта Р, Ловеро Д, Цаффорио П, ет ал.Биопсија рака на бази течности: мултимодални дијагностички алат у клиничкој онкологији.Адв Мед Онцол.2018;10:1758835918794630.дои: 10.1177/1758835918794630
17. Мандел П., Метаис П. Нуклеинске киселине у људској плазми.ЦР Сеанцес Соц Биол Фил.1948;142(3-4):241-243.
18. Моулиере Ф, Цхандрананда Д, Пискорз АМ, ет ал.Напредна детекција циркулишуће ДНК тумора анализом величине фрагмената.Наука преводи медицину.2018;10:466.дои:10.1126/сцитранслмед.аат4921
19. Ундерхилл ХР, Китзман ЈО, Хеллвиг Ц. ет ал.Дужина фрагмента ДНК тумора у циркулацији.ПЛОС гени.2016;12(7):е1006162.дои:10.1371/јоурнал.пген.1006162
20. Цхенг Ф, Су Л, Киан Ц. Циркулишућа ДНК тумора: обећавајући биомаркер у биопсији рака на бази течности.циљни тумор.2016;7(30):48832–48841.дои:10.18632/онцотаргет.9453
21. Беттеговда С., Саузен М., Леари РЈ ет ал.Детекција циркулишуће ДНК тумора у раним и касним стадијумима хуманих малигнитета.Наука преводи медицину.2014;6(224):224ра24.дои:10.1126/сцитранслмед.3007094
22. Мехес Г. Течна биопсија за мутациону предиктивну анализу солидног рака: перспектива патолога.Ј Биотецхнологи.2019;297:66-70.дои: 10.1016/ј.јбиотец.2019.04.002
[ПубМед] 23. Ленартс Л, Тувери С, Иатсенко Т, ет ал.Рано откривање тумора скринингом ДНК циркулишуће плазме: узбуђење или нада?Белгијско клиничко право.2020;75(1):9-1 дои:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Нисхида Н. Ефекат вируса хепатитиса и старења на метилацију ДНК у хуманој хепатокарциногенези.Хистопатологија.2010;25(5):647–654.дои: 10.14670/ХХ-25.647